一般生活在无氧环境，如生物体内、深层土壤或深层水域中。人工培养时需提供严格的厌氧条件，因为分子氧的存在对它们是有害的。包括一些与人类关系密切的微生物，如致病菌——破伤风杆菌（Clostridium tetani），丙酮、丁醇产生菌——丙酮丁醇杆菌（C．acetobutylicum），固氮菌——巴氏固氮杆菌（C．pasteuri-anum），沼气发酵的重要菌群——产甲烷杆菌（Methanobacterium）等。实验室培养中，常用焦性没食子酸等化学还原剂，吸收氧或用抽气泵抽除氧，亦可用静止的液体深层培养方法隔绝空气。在大规模生产实践中，常用密闭的发酵装置进行培养，例如丙酮丁醇梭菌的培养使用此法。